1实验目的
本测试旨在测评陶氏化学公司格利特消毒剂GLUTEXGS2的抗病毒效力。其方法是用稀释的消毒剂产品液处理被病毒附着污染的物体表面后，测定回收病毒的侵染性，根据病毒侵染性的降低程度来表征消毒剂的抗病毒能力。
2实验材料和方法
2.1测试病毒
试验所用猪传染性胃肠炎病毒(ATCCVR-)来自位于美国马里兰州罗克维尔的美国标准菌库(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)。该病毒悬浮液是组织培养基。
2.2细胞组织培养液和培养基
猪睾丸细胞来自位于艾奥瓦州Ames市的国家兽医服务局实验室。培养物利用添加了10％(V/V)牛胎儿血清(加热到56℃，经30min灭活)、0.5mg/mL水解乳蛋白、.5单位/mL青霉素、.5μg/mL链霉素、54μg/mL泰乐菌素、0.μg/mL两性毒素B和25mM四羟乙基哌嗪乙磺酸的最低必需养分培养基(MinimalEssentialMedium，MEM)进行常规培养。经培养后置于37℃含5％CO2的潮湿空气下的一次性实验室器皿中，制成单层组织培养物。培养物感染病毒后，置于装有相同成分但添加了2％血清的维持培养基中。
2.3试剂
磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)采用Dulbecco和Vogt的方法配制(实验医学杂志[J].,Vol.99：-)。合成硬水在使用当天配制，配制方法参照AOAC4.法(美国[美国公职分析化学工作者协会(AOAC)，第14版，，第70～71页)。
2.4消毒剂的制备
每份消毒剂在使用当天按照1∶的比例用mg/kgAOAC合成硬水进行稀释。
2.5病毒膜的制备
病毒膜通过将0.2mL的病毒悬浮液涂复在灭菌的皮氏玻璃培养皿底部制作而成。随后置于室温(约23℃)及环境湿度下，避免直接光照直至明显干燥(约45～75min)。
2.6用消毒剂处理病毒薄膜
干燥的病毒薄膜在约23℃下用2.0mL消毒剂稀释液(喷雾)处理，使两者保持10min的充分接触。在规定时间的接触后，用橡胶淀帚刮下培养皿底部物质，并立即取一小份病毒-消毒剂混合物加入交联葡聚糖(Sephadex)凝胶过滤柱中，用凝胶过滤法将病毒从消毒剂中分离出。
2.7病毒对照薄膜的处理
用消毒剂处理一份病毒薄膜的同时，另一份相同的病毒薄膜再次悬浮在2mL的磷酸盐缓冲生理盐水中，随后取一小份混合液加入交联葡聚糖凝胶(Sephadex)过滤柱中。
2.8交联葡聚糖凝胶过滤(SephadexGelFiltration)
交联葡聚糖凝胶过滤按照Blackwell和Chen的改良方法[美国公职分析化学工作者协会杂志53期(年)第～页]进行操作。3cc交联葡聚糖柱(LH-60-)利用磷酸盐缓冲生理盐水保持平衡，离心清除液体中的空隙体积，随后装入约0.6mL病毒-消毒剂混合液或病毒-磷酸盐缓冲对照混合液，并再次离心。给过滤液贴上“未稀释”标签以便滴定。
2.9病毒回收分析
对每份病毒-消毒剂和对照病毒混合液进行稀释，随后接种至细胞培养液中。每份稀释液至少使用4份培养液。单层细胞接种0.05mL稀释液，并在37℃下培养1h。吸收后，加入维持培养基(0.2mL)，并在恒温37℃下接种培养液。接种4d后，记录培养液细胞病变效应。细胞病变效应最终结果见表1。
2.10细胞毒性对照
每份已稀释的消毒剂通过交联葡聚糖凝胶过滤，利用磷酸盐缓冲液进行倍比稀释，随后接种于添加病毒-消毒剂混合液的细胞培养液中。接种后4d后，记录细胞培养液的细胞毒性。
2.11计算方法
采用Reed-Muench法(L.J.Reed和H.Muench.美国卫生医学杂志[J].，Vol.27:-)，计算以50％侵染性的log10(TCID50)和毒性(TD50)，以表示病毒效价及细胞毒性。
3实验结果
格利特消毒剂GLUTEXGS2对猪传染性胃肠炎病毒的病毒感染性和细胞毒性测定结果见表1。
4实验结论
陶氏化学公司格利特消毒剂GLUTEXGS2在测试条件下，能有效杀灭猪传染性胃肠炎病毒。
李亚雄等赞赏
